实验预习拯救兔兔

M胆碱受体系列实验之一

?有机磷酸酯类中毒、解救及胆碱酯酶活性测定

通过对有机磷酸酯类中毒的症状以及阿托品和解磷定的解救作用的观察，从整体水平了解乙酰胆碱递质-M胆碱受体的作用。

有机磷酸酯类通过难逆性抑制胆碱酯酶活性，使递质乙酰胆碱在体内堆积，产生中毒症状，由于乙酰胆碱作用的广泛性，其症状表现多样化，轻者以M样症状为主，中度者可同时有M、N样症状，重度者还可出现中枢症状。M受体阻断药阿托品能解除有机磷酸酯类中毒的M样症状，而胆碱酯酶复活药解磷定可复活胆碱酯酶，恢复其水解乙酰胆碱的能力，对M及N样症状均有效。两者合用可提高解毒效果。

有机磷酸酯类中毒程度及胆碱酯酶复活药解救疗效亦可通过测定胆碱酯酶活性的变化来反映。血及组织中胆碱酯酶使乙酰胆碱水解成胆碱和乙酸，未被分解的剩余乙酰胆碱与羟胺作用生成乙酰羟胺，再与铁离子在酸性溶液中形成棕色复合物，根据颜色深浅推算出酶的活性。

家兔1只，2.5～3.0kg

0.5%硫酸阿托品溶液、2.5%碘解磷定溶液、1%敌敌畏溶液、胆碱酯酶测定药盒

兔盒、注射器（1ml×4、2ml×3、10ml×1、抗凝试管×3、非抗凝试管×5、干棉球、酒精棉球、砂轮、小烧杯、μl加样器、加样器吸头、记号笔

1、家兔称重，观察并记录活动情况、呼吸（频率，有无呼吸困难）、瞳孔大小、唾液分泌、大小便、肌张力及有无肌震颤等。

2、用酒精棉球擦试兔耳外缘静脉，当其充血明显时，用剪刀横断耳缘静脉使血液（0.5～1.0ml）自然流入试管（试管内预先滴入2滴肝素，自然干燥后备用）中，并轻轻地振荡试管，防止凝血。供测正常胆碱酯酶活性。

3、给兔肌肉注射1%敌敌畏0.6ml/kg，观察并记录中毒症状。待中毒症状明显时，依上法采血供测中毒后胆碱酯酶活性。然后，立即静脉注射阿托品0.3ml/kg和碘解磷定2.7ml/kg，观察并记录中毒症状有何变化，在症状改善明显时，再次采血，供测给解救药后胆碱酯酶活性。

4、将以上试管内的血样离心(转/分)10分钟，取血浆50μl，测定胆碱酯酶活性。

5、胆碱酯酶活性测定：

取5支试管，按下列步骤加样：

混匀，离心（～转/分）10分钟，取上清，于nm处比色，测定吸收度（A）。

（1）单位定义：1ml血浆在37℃和底物作用20分钟，分解1μmol乙酰胆碱为1U。